Брой 10/2020
Д-р М. Ел Тиби, д.м.
ЕТ “АИППМП – Д-р Нели Пешева”
Какво представлява ЕЛИЗА
Диагностичният- аналитичен метод Ензимно-свързан имуносорбентен анализ ( Enzyme-Linked lmmunosorbent Assay} съкратено ЕЛИЗА,е широко използван в медицината. Методът е основан на базовата концепция в имунологията – реакцията между антиген и антитяло, която е високо специфична и позволява да се установят в течни проби много малки количества антигени или антитела.
Реакцията се използва за изследване на отделни лица или масово (скрининг}. Към апарата е приложена плака с 96 вдлъбнатини, които позволяват едновременно изследване и на толкова проби. Съществуват различни форми на апарата. Една от тях е показана на.
И при най-простата форма на апарата, проба от разредени антигени на COVID-19 се наслага към повърхността в една от вдлъбнатините. След това върху повърхността се прилага плазма от преболедувал от коронавирус , която съдържа антитела, потеърдени по PCR. Антителата се свързват с антигените. След известен период от време се добавя реактив, който потвърждава свързването. Последното се демонстрира с промяна на цвета на сместа, най-често жълт, койтообозначава, че реакцията е положителна. Ако се приложи плазма от здрав пациент, в която няма антитела срещу антигените, няма промяна на цвета, реакцията е отрицателна.
Позитиви на метода
– Методът служи за откриване на антитела с използване на съответни антигени и обратн.о за откриване на антигени с използване на съответни антитела.
– Метода открива антителата и антигените и при минимални количества.
– Ако в състава на плазмата съществуват и други антитела или в пробата взета от изследваното лице съществуват и други антигени, те не оказват влияние върху резултата.
– Реакцията е лесно изпълнима и не изисква специалисти. Може да се изпълнява от всяко
медицинско лице, след предварително запознаване с процедурата.
– Съществуват и преносими апарати, които не изискват непременно специализирана лаборатория.
-Методът е изгоден и икономически.
Негативи на метода
– Понякога цвета е неясен и не може да се отчете правилно и пробата трябва да се повтори.
– Реакцията трябва да се отчете навреме. Ако се забави, цвета избледнява и положителната проба ще се регистрира като негативна.
– За точността на пробата, антигена и антитялото трябва да са в реципрочно съотношение.
– Недостатъчното фиксиране на антигена към плаката води до фалшиво висок положителен резултат.
– Ако се използва за доказване на антитела у болен, реакцията не може да покаже дали инфекцията все още е активна или вече е преминала.
Практическо приложение на метода при COVID-19
След развитието на епидемията от COID-19 в пандемия, в някои страни започнаха да използват ЕЛИЗА за скрининг ( масово изследване), с оглед следене разпространението на корона вируса сред населението.
Но метода се оказа неподходящ. При сравняване на резултатите на едни и същи лица с молекулярният метод Полимераз Верижна Реакция (Polymerase Chain Reaction- PCR}, ELISA дава често фалшиви положителни и негативни резултати. Практиката показа, че нито един кръвен тест не показва 100% верен резултат.
Ако решите да се изследвате, вие ще покажете един от следните 4 резултати:
• Вие сте заразен и теста е положителен.
Вие сте заразен, но теста е негативен (фалшив негативен тест)
Вие не сте заразен и теста е негативен.
Вие не сте заразен, но теста е положителен ( фалшив положителен тест}
При единичните изследвания по ЕЛИЗА, всеки положителен тест следва да бъде потвърден по метода PCR, който дава 100% точни резултати. Но при масовото изследване това е безсмислено. По-добре е скринингът да се проведе с PCR , макар че е сложен и скъп тест, изисква специализирани изпълнители, обезопасени с облекло за предпазване от заразяване и се извършва само в специализирани лаборатории.
Оказа се още един недостатък на ЕЛИЗА: процентът на фалшивите положителни и негативни резултати нараства с повишаване разпространението на вируса.
Ако ЕЛИЗА има 95% специфичност и 95% чувствителност, тестът следва да идентифицира
95% от хората, които са положителни и 95% от тези които са отрицателни. Но това на практика не се осъществява Дори и при много ефективни тестове, резултатът зависи от процента на заразените в съответния колектив.
За да потвърдят ефективността на ЕЛИЗА, американски колектив, ръководен от проф.
Frasier, провежда проучвания в 2 големи заводи, с огромен брой работници. В единия завод
COVID-19 е засегнал 5% от работниците, а в другия 26%.
Изследователите съставят и в двата завода групи от по 500 работници. В проучването се включват здрави лица, не боледували и не показващи признаци на начална фаза на COVID-19.
И в двете групи се използват едни и същи апарати един и същи тест, с 95% специфичност и 95%
чувствителност. На всички участници в опита се взима кръв, отделя се плазмата и се провежда описания по горе тест. Получени са следните резултати: В група А се отчитат З9 (7.8%) а в група В 128 (25.6%) положителни проби, т.е. заразени с COVID-19.
След отчитане на резултатите по теста ЕЛИЗА, всички положителни плазми се изследват повторно с метода PCR за потвърждение на „положителните проби“ от ЕЛИЗА. Контролното изследване разшифрова получените резултати и показва действителното състояние.
В групата А, където COVID-19 е засегнал 5% от членовете на колектива : в серума на 1(0.2%) участник теста е негативно фалшив (лицето е заразено, но теста е негативен), в серумите на 24(4.8) заразени, положителните тестове се потвърждават (лицата са заразени и тестовите им са положителни ) и в серумите на 24(4.8%) се регистрират фалшиви позитивни тестове (лицата не са заразени, но тестове са положителни).
В група В, където COVID-19 е засегнал 26% от членовете на иолектива, резултатите са следните: в серумите на 6(1.2%) участници тестовете са фалшиво негативни, (лицата са заразени, но тестовете отрицателни), 119 (23.8%) са заразени, с потвърдени положителни тестове, в плазмите на 19 (3.8%) тестовете са фалшиво положителни (лицата не са заразени, но тестовете положителни).
Изнесените резултати потвърждават категорично, че методът ЕЛИЗА е неподходящ за сианиране на COVID -19. Затова за проследяване разпространението на корона вирус в целия свят, вилючително и в България , се използва метода Polymerase chain reaction (PCR), с направени в него подобрения, улесняващи използването му.
София, 11.09.2020 г.
REFERENCES
1.Balsam J, Ossandon М, Bruck НА et al. (2013) Low-cost technologies for medical diagnostics in low- resource settings. Expert Opin Med Diagn 7:243-55
2. Canady J, Arndt S, Каггег S et al. (2013) lncreased KGF expression promotes fibroЫast activation in
а douЫe paracrine manner resulting in cutaneous fibrosis. J lnvest Dermatol133:647-57
3. Dobrovolskaia Е, Gam А, Slateг JE (2006) Competition enzyme-linked immunosorbant assay (ELISA} can Ье а sensitive method for the specific detection of small quantities of allergen in а complex mixture. Clin Ехр Allergy 36:525-30
4. Frasier SL. The accuracy of corona virus antibody test results depends on the infection rate. Scientific American, July, 2020, 12-13.
5.. Gan SD, Patel KR. Enzime lmmunoassay and Enzime-linked immunosorbenr assay. J lnvest
Dermaol, 2013, 133, е 12.
6.Haapakoski R, Karisola Р, Fyhrquist N et al. (2013} Toll-like receptor activation during cutaneous allergen sensitization Ыocks development of asthma through IFN-gamma-dependent mechanisms. J lnvest Dermatol133:964-72
7. Mariani М, Luzzi Е, Proietti D et al. (1998} А competitive enzyme-linked immunosorbent assay for
measuring the levels of serum antibody to Haemophilus influenzae type Ь. Clin Diagn Lab immunol
667-74
8.. Yalow RS, Berson SA (1960) lmmunoassay of endogenous plasma insulin in man. J Clin lnvest
39:1157-75
